动物细胞中基因组DNA的微量提取（几种微量临床样品基因组DNA快速提取步骤）

想必现在有很多小伙伴对于几种微量临床样品基因组DNA快速提取步骤方面的知识都比较想要了解，那么今天小好小编就为大家收集了一些关于几种微量临床样品基因组DNA快速提取步骤方面的知识分享给大家，希望大家会喜欢哦。

样品提取步骤

提示：第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!血液样品a. 取1-100μl血液到1.5ml 的离心管中。b. 如果不足100μl，加入裂解液ML补足到100μl。c.加入10μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混匀，再加入100μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置10分钟。如果处理样品

干血点a. 用打孔机打孔的方法在血卡(上面有干血点) 上冲取3mm(1/8英寸) 直径血卡小片(上面有干血点),最多将3个直径3mm血卡小片放入1.5ml 的离心管中。一般血液应该点在特定纸或者血卡上面干燥,如903 paper or IsoCode paper (Schleicher & Schuell), BloodstainCard or FTA Card (Whatman), Guthrie test cards, or comparable blood cards.b.加入180μl裂解液ML。c.加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。d.56℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。e.加入200μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀。如果只处理一个3mm血卡小片，建议在200μl结合液CB 中加入2μl Poly Carrier储存溶液。f.70℃轨道摇床上面900rpm振摇10分钟。如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每3分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。接操作步骤项下7。

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组织样品a.新鲜或者解冻的组织在液氮中研磨成细粉后或者用解剖刀切成小碎块（切成微块可以提高产量）后取

口香糖a.将30mg口香糖切成小块放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。b.56℃轨道摇床上面900rpm振摇至少3小时。如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。c.加入200μl 结合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻涡旋振荡充分混匀。d.70℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。e.冷却后加200μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。f.最高速（约14,000rpm）离心1分钟，取上清加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。接操作步骤项下8。

来主定其政平少真名集传林，律究称圆。

法医材料a1. 剪下1 cm2烟头或者过滤嘴外层纸，切成6小块放入1.5ml离心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。a2. 剪下0.5-2.5 cm2信封或者邮票，切成小块放入1.5ml离心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。a3. 从毛发根部毛囊处开始剪下0.5-1 cm长度毛发放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。a4. 将指甲剪成小块放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。a5. 将约12.5px2信封沾染了血液、唾液、精液的材料剪成小块放入1.5ml离心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) (如果是精液需另加入20μl 1M DTT溶液)，立刻涡旋振荡充分混匀。接步骤b。b.56℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。一般毛发1小时裂解可以完成，如果不完全可以延长时间。指甲等难裂解物建议过夜裂解。最后没有裂解的不溶物在后续步骤e中会通过离心去除。c.加入200μl结合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻涡旋振荡充分混匀。d.70℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。e.最高速（约14,000rpm）离心1分钟，取上清加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。接操作步骤项下8。

微切割样品（包括福尔马林固定的微切割样品）a.加入15μl裂解液ML 到0.2 ml 离心管中，放入微切割样品。b.加入10μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) ，立刻涡旋振荡充分混匀。c.56℃水浴3小时（福尔马林样品16小时）至裂解完全，中间不时颠倒涡旋。d.加入15μl裂解液ML，再加入50μl结合液CB（加入1μl PolyCarrier），立刻涡旋振荡充分混匀。e.冷却后加入50μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，室温放置5分钟。如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。接操作步骤项下7。

用点由程位声话织布非，青准。

将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。

加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加20－50μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好）， 室温放置2-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于20μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

本文到此结束，希望对大家有所帮助。